使用 Nexera SIL-30AC 自動進樣器,可對柱前衍生胺基酸進行高速、高解析度的分析

食品和藥品等各種領域都需要進行胺基酸分析,為了提高以 HPLC 進行胺基酸分析時的靈敏度和選擇性,設計出了各種衍生方法。在此我們使用 RF-20Axs 螢光檢測器和具有自動預處理功能的 SIL-30AC 自動進樣器,介紹使用 OPA 和 FMOC 進行柱前衍生的胺基酸分析。

分析條件

使用 Nexera SIL-30AC 自動進樣器的自動前處理功能,在自動進樣器內分別以鄰苯二甲醛 (以下簡稱 OPA) 和 9-芴基氯甲酸甲酯 (以下簡稱 FMOC) 將一級和二級胺基酸自動衍生為螢光物質。使用超高速 YMC-Triart C18 管柱 (1.9 μm,YMC Co., Ltd.) 分離衍生胺基酸後,以 RF-20Axs 螢光檢測器進行高靈敏度離子檢測。由於 OPA 衍生胺基酸和 FMOC 衍生胺基酸需要在不同波長下檢測,因此利用自動波長切換功能進行同步分析。

分析結果

圖 1. 22 種胺基酸的層析圖 (10 μmol/L Each, 1 μL 進樣量)

圖 1 為 22 種胺基酸的層析圖,圖 2 為市售軟性飲料的層析圖。

表 2 說明重複分析 (n = 6) 獲得之所有 22 個胺基酸的峰面積重複性。
由於使用自動進樣器的自動衍生可以維持反應時間恆定,與手動操作的柱前衍生相比,重複性優異。

表 2. 重複性

圖 2. 軟性飲料的層析圖