使用 MALDI-7090 高解析 MALDI-TOF MS 分析 O-Linked型醣肽的聚醣結合位點

生物有機體合成的蛋白質，絕大多數都會發生醣化，醣化是指多個單醣 (例如葡萄糖及半乳糖) 組成的結構異質性聚醣 (Glycan)，進行的修飾。聚醣可分為N-linked型及O-linked型，對於調節蛋白質功能已知具有重要作用，而在生物製藥開發中，取得蛋白質醣化的資訊尤其重要。
與醣化有關的資訊，其中一項是聚醣與蛋白質的結合位置，幾乎所有的 N-linked 型聚醣都具有 -NXS/T- 胺基酸共有序列，這個序列可用於發現可能的 N-linked 型聚醣結合位點。N-linked 型聚醣的結合位點，可透過以下方式確定：以蛋白酶分解醣蛋白；使用特異性結合至聚醣的凝集素(lectin)，從分解產物中收集醣肽 (glycopeptides)；若有 H218O 存在時，使用 N 糖苷酶 (PNGase F) 從胜肽切開聚糖；使用穩定同位素標記 N-linked 型聚醣的結合位點，然後進行分析。1) N-linked 型聚醣的結合位點，也可透過 MSn 分析 N-linked 型醣肽特異性的產物離子，加以確定。2) 稱為 O-linked 型聚醣的聚醣基，已知會結合至蛋白質上的絲胺酸 (serine) 或蘇胺酸 (threonine)，這個 O-linked 型聚醣結合區域周圍的胺基酸序列，雖然相關資訊有限，但是不像 N-linked 型聚醣，並無適當的酶可切開鍵結，也尚未發現特異性產物離子，導致難以確定 O-linked 型聚醣的結合位點。本文提出一種確定 O-linked 型聚醣結合位點的方法，使用多種酶進行部分分解，並以 MALDI-7090 高解析 MALDI-TOF MS 進行分析。