單株抗體的 MRM 方法之開發 : SHIMADZU (Shimadzu Corporation)

近十多年來，單株抗體 (mAb) 已用於治療多種疾病，但主要在於癌症及自體免疫疾病。傳統上是透過配體結合分析 (LBA) 定量生物樣品中的治療性 mAb，但在延長方法開發時間、試劑採購、基質效應等方面，具有重大限制。

LC-MS/MS 方法逐漸成為 LBA 的替代方案，本報告說明如何應用 MRM 方法，定量含 β 類澱粉蛋白抗體 (6E10) CDR (互補決定區) 的胜肽片段。由於抗體共有一個保留序列，差異僅在三個環 (CDR1-3)，這些環各不相同，且含有抗體特異性胜肽，因此將CDR設為LC-MS/MS的標的。使用 LC-MS/MS 選擇性檢測 CDR1-3，可對患者血清或血漿分離出的疾病特異性抗體進行定性及定量，也可鑑定不同的治療藥物。

在胰蛋白酶消化及 Skyline 軟體最佳化後，利用Shimadzu LCMS-8050/8060 系統鑑定 CDR1-3 胜肽碎片 1)，以 MRM 方法檢測含 β 類澱粉蛋白抗體 (6E10) CDR 的胜肽片段。使用 Skyline 預測 LC-MS/MS 檢測的胜肽序列，並對每個前驅物離子和產物離子進行反應最佳化。接著使用經 Skyline 最佳化的 MRM 分析方法，擷取高度專一性及靈敏度的 LC-MS/MS 數據。

1) Skyline 軟體是由華盛頓大學 MacCoss 生物質譜實驗室所開發。

Fig. 1 Creating Analysis Methods Using Skyline (Selecting Trypsin Digestion Fragments Containing CDRs)

圖 1. 使用 Skyline 建立分析方法 (選擇含 CDR 的胰蛋白酶分解片段)

Fig. 2 Detection of Trypsin Fragments Containing CDR1-3 Using Standard Monoclonal Antibodies (6E10) Subjected to Trypsin Digestion (Data Analysis by Skyline)

圖 2. 使用經胰蛋白酶分解的標準單株抗體 (6E10) 資料，檢測含 CDR1-3 的胰蛋白酶片段 (以Skyline 數據分析)

Fig. 3 Calibration Curve for Selected Peptides with Three Transitions.

圖 3. 選定胜肽 (具有三個離子對) 之校正曲線。

詳細資訊

LCMS-8060

LCMS-8060 是質譜技術的一項突破性創新，大幅提高靈敏度和速度，有效提升 LC/MS/MS 的數據品質。

LCMS-8050

LCMS-8050 能夠在單一次分析中同時獲得定性和定量資訊。