利用 Edman 法進行小鼠單株抗體之N 端胺基酸定序

N 端結構分析是蛋白質結構分析的第一步。這項分析採用確認胺基酸序列的最可靠方法-Edman 法 (從蛋白質的 N 端依序切開胺基酸，以確認胺基酸序列) 來進行分析。
PPSQ-31A/33A 蛋白質定序儀系統可自動進行 Edman 反應、HPLC 分離、檢測及數據分析，以確認 N 端的胺基酸序列。

以下介紹使用 Edman 法對小鼠單株抗體進行 N 端胺基酸定序。

實驗流程
1. 將小鼠單株抗體 (60 pmol) 以 SDS-PAGE (處於還原條件) 進行電泳。
2. 完成電泳後，在 PVDF 膜上進行電泳轉印，並以 CBB 染色。
3. 切下圖 1 中的圓圈區域，以 PPSQ-31A 對其進行分析。

圖 2 顯示輕鏈前5個循環的分析結果。循環 1 結果顯示，N 端胺基酸為 D (天冬胺酸 aspartic acid)。循環 2 結果顯示，N 端的第二個胺基酸為 V (纈胺酸 valine)。分析至第 21 個循環結果顯示，從 N 端開始的序列為：Asp-Val-Val-Met-Thr-Gln-Thr-Pro-Leu-Thr-Leu-Ser-Val-Thr-Ile-Gly-Gln-Pro-Ala-Ser-Ile.

圖 3 顯示重鏈前5個循環的分析結果。
PTH 胺基酸衍生物的峰並未表現，表示重鏈的 N 端胺基 (α 胺基) 受到修飾。