胜肽圖譜分析

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胜肽圖譜分析需使用適當的酶或化學品，選擇性切開個別目標蛋白質，並使用 HPLC 或其他合適的方法分析獲得的胜肽片段 。指南要求使用胺基酸成分分析、N 端胺基酸序列分析或質譜法，在最大範圍內以 LC 鑑定分離的胜肽片段 。
通常使用驗證合適的、經驗證的分析方法，對原料藥及藥品進行胜肽圖譜分析，並依每批次的標準及測試程序，確認目標蛋白質的結構。As this method exploits differences in the LC 由於此方法是應用 LC 滯留時間的差異，因此再現性是主要重點。下方內容介紹以高效液相層析法 (HPLC) 對馬心肌紅蛋白 (horse heart myoglobin) 進行胜肽圖譜分析的結果。

馬心肌紅蛋白分析

實驗流程

  1. 以胰蛋白酶對馬心肌紅蛋白進行酶消化。
  2. 使用逆相管柱對胰蛋白酶分解產物進行 LC/MS 分析。

 

實驗結果

圖1 顯示馬心肌紅蛋白經胰蛋白酶消化產物的總離子層析圖。圖2 以第16號峰的質譜圖為例。圖3 顯示胰蛋白酶消化的理論值與 LC/MS 量測值的部分比較結果。圖4 顯示使用此方法檢測到的馬心肌肌紅蛋白胜肽的回收率。
所有胜肽均已鑑定 (除了處於胺基酸狀態的離胺酸之外)。(回收的胜肽片段在圖中標示底線。)
胜肽圖譜分析方法會比較胜肽的沖提時間，以便分辨標準樣品與測試樣品之間胺基酸序列的差異。除了胜肽沖提時間之外，也可以採用 MS 和 MS/MS 質譜儀及蛋白質定序儀系統，以確認回收胜肽的胺基酸序列，進一步提升準確度。

LCMS-2020 高效液相層析質譜儀

在較寬的濃度範圍內檢測不純物，需要高靈敏度及高線性範圍。新開發的 LCMS-2020 離子光學系統 Qarray® Optics，達到優越的靈敏度、再現性、線性。

各種脂溶性及水溶性不純物，需要更廣泛的游離法來進行分析。DUIS-2020 是多種 LCMS-2020 游離法之一，其結合 ESI 與 APCI，以確保不會遺漏極性顯著不同的不純物。