轉譯後修飾分析 | 以 MALDI-TOF MS 進行磷酸化分析 (1)

以 MALDI-TOF MS 進行磷酸化分析 (1)

■ 選擇適當的磷酸肽檢測量測模式及基質

蛋白質磷酸化是一種轉譯後修飾，在生物體中具有重要功能。
下說明使用 MALDI 檢測進行磷酸肽分析。
為提高解析度及準確度，使用反射模式進行正常的胜肽量測；但是在此模式中，會出現所謂的中性丟失現象，磷酸基自磷酸肽解離，導致難以測得目標磷酸肽的訊號。因此這類不安定化合物，需要先以線性模式量測。

如圖 1 所示，在線性模式僅觀察到磷酸肽的對應訊號。使用 DHB 為基質，在反射模式下也可得到中性丟失相對受抑制的頻譜。反之，也可依據中性丟失情形，評估是否存在磷酸化。如果比較反射模式和線性模式，以及 DHB 和 CHCA，發現有中性丟失情形，則表示胜肽很可能發生磷酸化。

磷酸肽分析的另一個問題在於，磷酸化修飾會造成胜肽檢測的靈敏度顯著降低，因此往往不容易在蛋白酶分解產物中觀察到磷酸肽。
克服這個問題的方法，包括在基質中加入磷酸，並提高三氟乙酸 (TFA) 的濃度，以維持酸度。
圖 2 顯示以 DHB 為基質時加入磷酸的效果，以反射模式分析四種分解後蛋白質的混合物。僅使用 DHB 量測時，可觀察到大量存在的磷酸肽，而少量存在的磷酸肽，則幾乎完全觀察不到。但如果在基質中加入磷酸，即可觀察到接近 m/z 3,000 的磷酸肽。

因此，變更量測模式或基質成分，可提高樣品混合物中磷酸肽的檢測靈敏度。這些基本步驟可用於結構分析，例如 MS/MS。

AXIMA Performance MALDI-TOF MS

AXIMA Performance 是質譜分析中強大的工具之一，可提供資訊豐富的圖譜，且具有更高的靈敏度及 更可靠的鑑定結果。這是一款用途廣泛且功能強大的 TOF-TOF 系統，整合多項工作流程，適用於各種分析需求。

• 從蛋白質體、其他生物及有機樣品的高能量 MS/MS，到高質量完整蛋白質的全方位分析
• 真正的高能量 MS/MS - CID，碰撞能量為 20keV
• 採用革命性閘控技術，達到最佳前驅物離子選擇解析度
• 優異的靈敏度 - 完美設計，絕不丟失 MS/MS 訊號