轉譯後修飾分析 | 以 MALDI-TOF MS 進行磷酸化分析 (2)

使用無接縫 PSD 進行磷酸肽定序分析

近年來，質譜已應用於分析蛋白質磷酸化及磷酸化位點，磷酸化位點可由多種不同類型的 MS/MS分析加以確定。

以下說明使用MALDI法以無接縫 PSD (sPSD)，分析磷酸化修飾位點。
碰撞誘發解離 (CID) 常用於 MALDI-MS/MS 的胺基酸定序分析，但由於與惰性氣體碰撞，導致脆弱的磷酸基發生解離，這種方法不容易取得磷酸化位點的資訊。
使用無縫 PSD (sPSD) 的 MS/MS 量測，不需要惰性氣體，並可得到 MS/MS 質譜圖，同時也可稍微抑制磷酸基的解離。

圖 1 顯示以 DHB 為基質，取得的雙磷酸化胜肽之無縫 PSD (sPSD) 質譜圖。從圖 1 的碎片離子分配結果可知，y 離子 (C 端碎片) 優先形成。
雖然觀察到碎片離子的磷酸基解離，但強度較低 (圖中的 y7-98)。獲得的 MS/MS 質譜圖，足以從磷酸化胺基酸殘基的質量，確定完整的序列。

圖 1. MAP 激酶片段 177-189 (一種雙磷酸化胜肽) 的 sPSD 圖譜

已知使用 DHB 時，此效應會放大，但由於碎片離子檢測靈敏度不足，常規 PSD 並不實用。sPSD 的一大特性在於碎片離子的生成效率優於 PSD，由於靈敏度夠高，因此可對磷酸肽進行 MS/MS 量測。

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