轉譯後修飾分析 | 以質譜儀分析合成蛋白質的 N 端修飾

使用質譜儀分析合成蛋白質 N 端修飾

蛋白質轉譯後修飾分析，近年來日益重要。在一定程度上，可以從胺基酸序列預測修飾的類型，但實務中仍需進行測試加以證明。
以下說明一種簡易的修飾分析方法，使用 MALDI-TOF 質譜儀分析 Transdirect 昆蟲細胞 (無細胞蛋白質合成試劑組)。

N 荳蔻酸化 (N-myristoylation)分析： 蛋白質 N 荳蔻酸化是一種修飾反應，在去除起始劑甲硫胺酸 (methionine) 之後，將荳蔻酸 ( myristate，14 碳飽和脂肪酸) 轉移至新暴露的 N 端甘胺酸 (glycine) 殘基。在許多參與細胞訊息傳遞的蛋白質中，皆發現此修飾，已知對於結合至細胞膜以及蛋白質交互作用，具有極為重要的功能。我們以 tGelsolin 為模式蛋白進行分析，已知其中會發生 N 荳蔻酸化。

■ 測試流程

■ 結果
加入荳蔻酸輔酶 A (myristoyl-CoA) 做為修飾反應的受質，結果測得 m/z 1,926.2 胜肽片段，判斷為 N 荳蔻酸化所產生 (圖 1)。MS/MS 分析鑑定出此峰為含荳蔻酸基的 N 端胜肽片段 (圖 2)。相同方法可用於分析 N 乙醯化 (N-acetylation) 和起始劑甲硫胺酸去除情況。

上述結果顯示，Transdirect 可在 N 端引起典型的蛋白質修飾，若搭配質譜儀使用，此方法能夠為 N 端修飾分析提供強大的工具。
* 此為與山口大學醫學院 Toshihiko Utsumi 教授共同研究的成果。

Transdirect 昆蟲細胞 (無細胞蛋白質合成試劑組)

這個新型的無細胞蛋白質合成試劑組，是以昆蟲細胞培養製成，蛋白質合成能力優於兔網狀紅血球溶胞產物系統。此試劑組附有最佳化的反應緩衝液及表現載體，可輕鬆進行最佳的蛋白質合成測試。

MALDI-TOF Mass Spectrometry

採用獨特的四極桿離子阱技術，對 MALDI 產生的分子離子進行高靈敏度且準確的 MSⁿ 質譜量測。
對前驅物離子具有高度選擇性，即使存在大量雜質離子，仍能夠可靠的選擇目標離子，進而取得高品質的 MS 分析數據。
提供高度準確的 MS 分析數據，以準確預測結構。
分析軟體為醣肽結構分析提供有力的支援。