沙坦類 (Sartan-Type) 原料藥中的亞硝胺 (Nitrosamines)之分析
- 2018 年 7 月，美國食品藥物管理局 (FDA) 發佈致癌不純物：在中國製造商生產的纈沙坦 (Valsartan) 原料藥，測得亞硝胺類化合物 (N-nitrosodimethylamine (NDMA) 和 N-nitrosodiethylamine (NDEA))。隨後，全球回收使用纈沙坦 (Valsartan) 原料藥的藥品，而纈沙坦 (Valsartan) 則是用於治療高血壓及充血性心臟衰竭。
- FDA 發佈其分析方法，採用氣相層析質譜儀 (GC-MS 及 GC-MS/MS) 檢測 NDMA 及 NDEA，而歐洲藥品品質與衛生保健局 (EDQM) 採用的方法，則是液相層析質譜儀 (LC-MS/MS)，並以 GC/MS 分析法為參考資訊。
- 本文舉例說明使用頂空進樣器 (HS-20) 搭配 GC-MS (GCMS-QP2020 NX) 和 GC-MS/MS (GCMS-TQ8040 NX) 氣相層析儀，分析纈沙坦 (Valsartan) 原料藥中的 NDMA 及 NDEA。
使用頂空 GC-MS 分析 NDMA 及 NDEA
在 2.5 至 10 μg/L 範圍內，分別以 NDMA 和 NDEA 製備標準溶液 (DMSO 溶液)，然後使用 HS-20 及 GCMS-QP2020 NX 量測，建立層析圖和校正曲線。
兩種成分的貢獻率 (R2) 皆為 0.999，在上述濃度範圍內，且具有良好線性。
頂空 GC-MS 的同時準確度
使用 HS-20 及 GCMS-QP2020 NX，分別以 5.0 μg/L NDMA 和 NDEA 製備標準溶液 (DMSO 溶液)，在六個循環中重複進樣，計算其峰面積值。即使在 5.0 μg/L 的低濃度範圍內，也取得良好的再現性。
Repeatability 重複性
纈沙坦 (Valsartan) 原料藥、氯沙坦 (Losartan) 原料藥、奧美沙坦 (Olmesartan) 原料藥，以 5% (w/v) 濃度溶解於 DMSO。樣品中加入 NDMA 和 NDEA，使最終濃度為 2.5、5.0、10 μg/L，然後使用 HS-20 及 GCMS-QP2020 NX，進行添加劑回收率測試。取得良好的結果，回收率在 88% 至 114% 之間。
| API | Valsartan | Losartan | Olmesartan Medoxomil | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Con c. | Recovery Rate (%) | Recovery Rate (%) | Recovery Rate (%) | |||
| NDMA | NDEA | NDMA | NDEA | NDMA | NDEA | |
| 2.5 μg/L | 108.6 | 104.6 | 95.0 | 113.4 | 103.4 | 114 |
| 5.0 μg/L | 99.9 | 96.5 | 96.1 | 107.9 | 89.8 | 88.7 |
| 10.0 μg/L | 100.5 | 114.2 | 99.8 | 107.7 | 98.3 | 102.7 |
實驗條件
| Headspace gas sampler | ：HS-20 |
| Oven temperature | ：120 °C |
| Sample line temperature | ：125 °C |
| Transfer line temperature | ：130 °C |
| Gas pressure for vial compression | ：103 kPa |
| Vial warming time | ：15 minutes |
| Vial compression time | ：1 minute |
| Compression equilibration time | ：0.10 minutes |
| Injection time | ：1 minute |
| Needle flush time | ：1 minute |
| Sample injection volume | ：1 mL |
| GC Column: | ：SH-PolarWax （30 m x 0.25 mm x I.D,0.50 μm） |
| Carrier gas | ：He |
| Control mode | ：Pressure |
| Oven temperature |
：40 °C（2 minutes)→10 °C/minute
→120 °C→ 25 °C/minute → 230°C（5-6 minutes)
|
| Solvent |
N, N-Dimethyl sulfoxide
|
| Instrument | GCMS-QP2020 NX with HS-20 |
| MS (EI Method) Ion source temperature | ：200 °C |
| Interface temperature | ：230 °C |
| Tuning mode | ：Standard |
| Measurement mode |
：NDMA SIM（m/z 74.0）
：NDEA SIM （m/z 102）
|
| Event time | ：0.30 seconds |
使用頂空 GC-MS/MS 分析 NMDA 及 NDEA
在 1.0 至 50 μg/L 範圍內，分別以 NDMA 和 NDEA 製備標準溶液 (DMSO 溶液)，然後使用 HS-20 及 GCMS-TQ8040 NX 量測，建立層析圖和校正曲線。
兩種成分的貢獻率 (R2) 皆為 0.999，在上述濃度範圍內，且具有良好線性。
頂空 GC-MS/MS 的同時準確度
使用 HS-20 及 GCMS-TQ8040 NX，分別以 1.0 μg/L NDMA 和 NDEA 製備標準溶液 (DMSO 溶液)，在六個循環中重複進樣，計算其峰面積值。
即使在 1.0 μg/L 的低濃度範圍內，也取得低於 10% 的良好重複結果。
再現姓
纈沙坦 (Valsartan) 原料藥、氯沙坦 (Losartan) 原料藥、奧美沙坦 (Olmesartan) 原料藥，以 2% (w/v) 濃度溶解於 DMSO。樣品中加入 NDMA 和 NDEA，使最終濃度為 2.5、5.0、10 μg/L，然後使用 HS-20 及 GCMS-TQ8040 NX，進行添加劑回收率測試。取得良好的結果，回收率在 83% 至 119% 之間。
| API | Valsartan | Losartan | Olmesartan Medoxomil | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Con c. | Recovery Rate (%) | Recovery Rate (%) | Recovery Rate (%) | |||
| NDMA | NDEA | NDMA | NDEA | NDMA | NDEA | |
| 2.5 μg/L | 109.5 | 858 | 101.2 | 83.0 | 113.3 | 119.1 |
| 5.0 μg/L | 97.4 | 100.5 | 101.9 | 99.1 | 114.2 | 96.1 |
| 10.0 μg/L | 103.7 | 105.9 | 106.4 | 110.4 | 119.4 | 100.9 |
實驗條件
| Headspace gas sampler | ：HS-20 |
| Oven temperature | ：160 °C |
| Sample line temperature | ：165 °C |
| Transfer line temperature | ：175 °C |
| Gas pressure for vial compression | ：80 kPa |
| Vial warming time | ：25 minutes |
| Vial compression time | ：1 minute |
| Compression equilibration time | ：1 minutes |
| Injection time | ：1 minute |
| Needle flush time | ：1 minute |
| Sample injection volume | ：1 mL |
| GC Column: | ：SH-PolarWax （30 m x 0.25 mm x I.D,0.50 μm） |
| Carrier gas | ：He |
| Oven temperature |
：40 °C（0 minutes)→8 °C/minute
→140 °C→ 25 °C/minute → 230°C（3-9 minutes)
|
| Solvent |
N, N-Dimethyl sulfoxide
|
| Instrument | GCMS-TQ8040 NX with HS-20 |
| MS (EI Method) Ion source temperature | ：200 °C |
| Interface temperature | ：230 °C |
| Tuning mode | ：Standard |
|
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