醣胜肽的結構分析 : SHIMADZU (Shimadzu Corporation)

概述

糖鏈結構 • 醣類分析

醣胜肽的結構分析

小鼠單株抗體醣胜肽的結構分析

醣肽中的主要糖鏈，可依結合的胺基酸殘基類型，大致分為氧型 (O-type) 糖鏈和氮型 (N-type) 糖鏈。
氧型 (O-type) 糖鏈結合至蛋白質的絲胺酸 (serine) 或蘇胺酸 (threonine) 殘基，氮型 (N-type) 糖鏈則結合至天冬醯胺酸 (asparagine) 殘基。
依指南規定，需要對蛋白質的糖鏈鍵儘可能進行完整的分析和數據擷取。
以下舉例說明小鼠單株抗體醣胜肽的結構分析。

測試及研究流程

使用 SDS-PAGE，從染色膠體切下抗體的對應條帶。

使用胰蛋白酶進行膠體內消化。

使用 Sepharose* CL-4B (GE Healthcare，美國) 從胜肽片段中分離出醣胜肽片段分液，再以質譜儀進行分析。

使用 AXIMA Resonance 進行 MS ⁿ 分析。
* Sepharose 為 GE Healthcare 公司的商品名。

結果
圖 1 顯示在 Sepharose 鍵結分液中有效回收的醣胜肽。

圖 1. Sepharose CL-4B 分液之質譜圖
(正離子模式)

圖 2 是使用 m/z2764 為前驅物離子的 MS/MS 質譜圖 (單一同位素峰，相當於圖 1 的 m/z2767 分子離子)。
含醣離子完全脫附，並觀察到胜肽離子。
圖 3 為含醣離子完全脫附 ( m/z1157) 及脫附前離子 ( m/z1240) 的 MS/MS/MS 質譜圖。比較這些質譜圖，顯示醣胜肽序列為「Glu-Glu-Gln-Phe-Asn-Ser-Thr-Phe-Arg」，糖鏈結合的胺基酸殘基為天冬醯胺酸 (asparagine, Asn)。

圖 2. MS/MS 質譜圖 (m/z 2764，AXIMA-QIT)

圖 3. MS/MS/MS 質譜圖 (上圖， m/z 1240，AXIMA Resonance) ，類 MS/MS/MS 質譜圖 (下圖，m/z 1157，AXIMA Resonance)

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