使用全自動樣品製備 LC/MS/MS 系統分析人類血漿中的 Favipiravir

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Fig. 1 Fully Automated Sample Preparation LC/MS/MS System (CLAM™+LC/MS/MS)

圖 1. 全自動樣品製備 LC/MS/MS 系統 (CLAM™+LC/MS/MS)

Favipiravir (商品名：Avigan ®)是一種 RNA 聚合酶抑制劑，由 FUJIFILM Toyama 化學公司開發，用於治療流感。在應用新知Application News C229 中介紹了一種穩健、高靈敏度的分析，其為使用 LC/MS/MS 加上手動前處理，不過，血漿樣品的手動預處理需要一定程度的工作量。而本篇報告說明以全自動樣品製備 LC/MS/MS 系統分析 favipiravir 的方法，可減少程序之間的差異、樣品混淆錯誤及樣品暴露風險 (圖 1)。

血漿 Favipiravir 的全自動樣品製備

使用 LCMS ™分析血漿中的低分子量化合物，通常以有機溶劑去蛋白，然後收集上清液。使用全自動樣品製備 LC/MS/MS 系統，則只需要在血漿分離後，將採血管放入系統，即可自動完成製備步驟 (圖 2)。下一個樣品的前處理也可在 LC/MS/MS 分析時同步進行，大幅減少每個樣品所需的分析時間。從血漿前處理到使用 LC/MS/MS 完成 favipiravir 分析，每個樣品的分析循環時間為 6.5 分鐘。

Fig. 2 Workflow of Fully Automated Sample Pretreatment

圖 2. 全自動樣品預處理流程

 

樣品分析條件及前處理

Favipiravir (PN: C8720*1) 為目標化合物，[13C,15N]-favipiravir (PN: C8853 *1)為其穩定同位素，購自 Shimadzu 集團旗下的 Alsachim 公司。使用 [ 13C,15N]-favipiravir 做為內標準品 (ISTD)。市售人類血漿經 EDTA 2K 處理後，加入 Favipiravir，以製作校正曲線和 QC 樣品。依據表 1 的 LC 和 MS 分析條件及表 2 的 MRM 轉換，進行分析。分析管柱採用 Shimpack Scepter ™C18-120 (50 mm×2.1 mm I.D., 1.9 µm, P/N: 227-31012-03) 。圖 3 為化合物的 MS 層析圖及結構式。依據 favipiravir 血漿濃度 1、2、5、10、20、50、100 µg/mL 各校正點，繪製校正曲線 (每一校正點 n=5)。[ 13C,15N]- favipiravir (20 µg/mL) 溶液使用乙腈製備，做為內標準品 (ISTD). 血漿樣品加入 favipiravir 的前處理步驟，如圖 2 所示。透過以下一系列步驟，自動製備樣品：混合 20 μL 75% 異丙醇 (isopropyl alcohol, IPA)、50 μL 血漿、10 μL 內標準品及 200 μL 乙腈，搖晃混勻，然後使用 PTFE 濾膜過濾。最後，以製備的樣品進行分析。 *1 Shimadzu GLC 及 Alsachim 產品編號

LC and MS Analytical Conditions

caption

MS Chromatograms and Structural Formulas of Favipiravir (Left) and [13C,15N]-Favipiravir (Right)

MS 層析圖、Favipiravir (左) 和 [13C,15N]-Favipiravir (右) 結構式

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