使用 LCMS™-8060NX 對人類血清的醛固酮 (Aldosterone) 進行高靈敏度分析
LCMS™-8060NX
本報告舉例說明使用三重四極桿質譜儀 LCMS-8060NX，對血清中的醛固酮 (aldosterone) 進行高靈敏度分析。使用標準樣品製作的校正曲線，在 0.5-10,000 pg/mL (R2=0.9998) 濃度範圍內呈線性，定量下限濃度的 %RSD 為 3.96%，每一校正點的準確度範圍為 95.58-109.84%。此外，加入醛固酮 (1 pg/mL) 的血清樣品準確度為 106%，表示分析中使用的方法可適用於實際樣品。醛固酮 (圖 1) 是腎上腺皮質生成的礦物性皮質素，對於電解質恆定、循環血液體積、血壓調節都有關鍵作用。血中醛固酮濃度可用於診斷高血壓疾病，例如原發性高醛固酮症、糖尿病腎病變或間質性腎炎等。醛固酮濃度的量測，可使用放射性免疫分析法 (RIA) 或酵素免疫分析法 (EIA)，但是使用免疫反應量測醛固酮濃度，可能由於樣品中相似結構的類固醇賀爾蒙出現交叉反應，造成量測結果偏高。使用高選擇性的 LC/MS/MS，可避免傳統方法帶來的問題，達到更準確的定量分析結果。本報告舉例說明使用 LCMS-8060NX，對血清中的醛固酮進行高靈敏度定量分析。
樣品製備
圖 1. 醛固酮 (Aldosterone) 的結構式
標準樣品使用 50% 甲醇序列稀釋，以 0.5-10,000 pg/mL 的濃度製備，並繪製校正曲線。對於加入血清的樣品，以市售不含類固醇的人類血清加入醛固酮，使血清濃度為 1 pg/mL。標準樣品及內標準品加入 100 µL 血清，然後以己烷 (hexane) 和乙酸乙酯 (ethyl acetate) (9:1) 混合液充分搖勻。所得溶液離心 10 分鐘，揮發有機溶劑層至完全乾燥，再使用 50% 甲醇溶解。
分析條件
HPLC 及 MS 的分析條件如表 1 所示。MRM 轉換如表 2 所示。
校正曲線
使用標準樣品 (內標準法，每一濃度 n=3) 製作的校正曲線，，在 0.5-10,000 pg/mL 的動態範圍內具有良好的線性，決定係數 (R 2) 為 0.9998。定量下限濃度 %RSD 為 3.96%，每一校正點的準確度範圍為 95.58-109.84%。圖 2 為校正曲線，圖 3 為 0.5 pg/mL 標準溶液的 MRM 層析圖。
加入人類血清的樣品
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依據預處理樣品的量測面積，使用圖 2 的校正曲線計算醛固酮濃度。達到良好的準確性，血清中加入 1 pg/mL 的醛固酮平均濃度為 1.06 pg/mL (n=3)。圖 4 顯示加入人類血清之樣品的 MRM 層析圖。