使用全自動樣品製備 LC/MS/MS 系統同步分析人類血漿中的 Remdesivir 及代謝物

Remdesivir (商品名：Veklury^®), 是一種前驅藥，對單股 RNA 病毒具有抗病毒活性，由 Gilead Science (美國) 開發用於治療伊波拉病毒疾病。已知其部分代謝為活化的 GS-441524，這是 remdesivir 在體內的主要代謝物1)。在應用新知 Application​​​​​​​ News C218, 中介紹了一種穩健、高靈敏度的同步量測方法，使用 LC/MS/MS 加上手動前處理，血漿樣品的手動預處理需要一定程度的工作量。本報告說明以自動樣品製備 LC/MS/MS 系統，同步分析 remdesivir 及其代謝物，可減少程序之間的差異、樣品混淆錯誤及樣品暴露風險 (圖 1)。

使用 LCMS™ 析血漿中的低分子量化合物，通常以有機溶劑去蛋白，然後收集上清液。使用全自動樣品製備 LC/MS/MS 系統，則只需要在血漿分離後，將採血管放入系統，即可自動完成製備步驟 (圖 2)。下一個樣品的前處理也可與 LC/MS/MS 分析同步進行，大幅減少每個樣品所需的分析時間。從血漿前處理到使用 LC/MS/MS 同步分析 remdesivir 及其代謝物，每個樣品的分析循環時間為 7 分鐘。

Remdesivir (P/N: C8799*) 及 GS-441524 (P/N: C8847*)為目標化合物，[U-Ring-13C6]-remdesivir (P/N: C8845*) 及 [13C5]-GS-441524 (P/N: C8855*)為其穩定同位素，購自 Shimadzu 集團旗下的 Alsachim 公司。使用 [U-Ring-13C6]-remdesivir 及 [13C5]-GS- 441524 做為內標準品。 市售人類血漿經 EDTA 2K 處理後，加入 remdesivir 及 GS-441524。其次，接著校正曲線及 QC 樣品。依據表 1 的 LC 和 MS 分析條件，及表 2 的多重反應監測 (MRM) 數據擷取參數，進行分析。分析管柱採用 Shim-pack ScepterTM C18-120 (50 mm×2.1 mm I.D., 1.9 μm)。圖 3 為 MS 層析圖。依據 remdesivir 濃度為 100、500、1,000、2,500 與 5,000 ng/mL 的 5 個校正點，以及 GS-441524 濃度為 5、25、50、250 和 500 ng/mL 的 5 個校正點，進行校正 (每一校正點 n=5)。將 [U-Ring-13C6]-remdesivir (2.5 μg/mL) 及 [13C5]-GS-441524 (0.25 μg/mL) 與甲醇混合，做為內標準品。透過一系列步驟自動製備樣品，包括混合 20 μL 75% IPA、50 μL 血漿、10 μL 內標準品及 100 μL 乙腈，搖晃混勻，然後使用 PTFE 濾膜過濾，如圖 2 所示。最後，製備的樣品以 LC/MS/MS 進行分析。