溶液分析是使用紫外光-可見光分光光譜儀進行測量時的常見應用。有許多類型的比色槽用於溶液分析。取決於比色槽的材質、光徑長度和容量,其應用與目的可能不同,而使用時需要觀察的重點也不同。在此我們檢視多種類型比色槽的特性,以及使用時應考量的一些重點。

1 比色槽的材質

表1 不同材質的比色槽之測量波長範圍

比色槽的材質不得在測量波長下吸光。經常用於比色槽的兩種材質為玻璃和石英。聚苯乙烯 (PS) 和聚甲基丙烯酸甲酯 (PMMA) 主要用於拋棄式比色槽。表 1 列出不同類型的比色槽可用的波長。

 

圖 1 不同類型的比色槽之穿透率

如此,可測量的波長範圍會隨比色槽的材質而異。圖 1 呈現使用空氣做為測量對象,不同類型的比色槽取得之透光光譜。可看到在表 1 中給定的測量波長範圍內,比色槽不會吸光。

除了測量波長以外,也有化學物質耐受性問題。除了搭配強鹼溶液使用以外,玻璃和水晶具有極佳的化學物質耐受性。不過樹脂比色槽的化學物質耐受性隨材質而異,因此選擇用於測量的比色槽時必須注意。應注意的另一個重點是,使用後通常會棄置的個別拋棄式比色槽,光徑長度有小幅差異。這可能導致定量數值的誤差。首先依據測量波長和使用的溶劑,選擇比色槽的類型 (材質)。

2 低濃度和高濃度樣品的分析

圖2 過錳酸鉀的吸光光譜 (光徑長度:100 mm 和 10 mm)

光徑長度 10 mm 的比色槽用於許多不同類型的溶液分析。不過若樣品濃度低,可能無法使用這種大小的比色槽取得足夠的吸光度。雖然此類樣品的濃度可以使用 10 mm比色槽,但若樣品揮發或在濃縮過程中產生化學變化,可能難以維持濃度。在這種情況下,使用「長光徑比色槽」可有效測量。有光徑長度 20 mm、50 mm 和 100 mm 長光徑比色槽。吸光度會隨比色槽的光徑長度成比例增加。圖 2 顯示以 10 mm比色槽和 100 mm比色槽,分析 10 mg/L 過錳酸鉀溶液所取得的結果。可看到 100 mm比色槽的吸光度是 10 mm比色槽吸光度的 10 倍。

圖4 牛血清白蛋白吸光光譜 (超微型比色槽;樣品容量:50 μL)

對於高濃度樣品,稀釋樣品可以使用 10 mm 比色槽測量。不過有些樣品無法輕易稀釋。例如由於與溶劑的交互作用,稀釋樣品可能會造成吸光度改變,亦即峰的波長偏移。

使用短光徑比色槽測量的一項眾所周知應用,是近紅外線範圍內的溶液分析。若使用 10 mm 比色槽在近紅外線範圍內測量,經常由於溶劑吸光而發生飽和,以致無法確定樣品的吸光。使用短光徑比色槽可防止溶劑導致的吸光飽和。對於低和高濃度樣品,可依據吸光度或穿透率大小選擇比色槽的光徑長度。

3 微量樣品分析

若無法取得以 10 mm 比色槽測量所需的樣品容量 (亦即,3 mL),可有效使用專為微量樣品分析設計的比色槽。此類比色槽包括「半微型比色槽」(所需容量:1 mL)、「微型比色槽」(所需容量:400 μL) 和「超微型比色槽」(所需容量:50 至 100 μL)。雖然取決於所使用儀器取得的光束大小,但為了防止測量光束照射樣品以外的部分,這些類型的比色槽需要使用特殊的比色槽固定架。圖 4 呈現使用超微量比色槽 (樣品容量:50 μL) 樣品取得的測量結果。使用微量比色槽時,照射樣品的光強度減少,因此雜訊量會略微增加。不論如何,可看到取得良好結果。

除了這些比色槽以外,也有「適用於極微量測量的 3 μL 毛細比色槽組」。樣品會放入極窄的玻璃管內,提供約 0.5 mm 的光徑長度。如此可以僅用 3 μL 的樣品容量進行測量。使用微量比色槽分析的眾所周知應用,包括分析水中的分離子界面活性劑,以及蛋白質萃取物和 DNA 的定量。只有少量樣品容量可用時,可依據此容量選擇比色槽。

4 揮發性樣品的分析

本文著重於常用的比色槽,我們已經檢視這些比色槽的特性,以及其使用時應注意的一些重點。除了這些以外,市面上也可找到多種其他類型的比色槽,包括具有 0.05 mm (50 μm) 極短光徑長度的組裝類型比色槽,和可以僅用 10 μL 樣品容量進行 10 mm 光徑長度測量的比色槽。使用適合應用的比色槽,可以簡單並準確測量。

5 總結

本文著重於常用的比色槽,我們已經檢視這些比色槽的特性,以及其使用時應注意的一些重點。除了這些以外,市面上也可找到多種其他類型的比色槽,包括具有 0.05 mm (50 μm) 極短光徑長度的組裝類型比色槽,和可以僅用 10 μL 樣品容量進行 10 mm 光徑長度測量的比色槽。使用適合應用的比色槽,可以簡單並準確測量。