LC/MS/MS 短鏈脂肪酸分析方法包

LC/MS/MS Method Package for Short Chain Fatty Acids

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用於分析短鏈脂肪酸和有機酸

腸道細菌產生的短鏈脂肪酸例如乙酸、丙酸和丁酸等，研究顯示這些物質與肥胖和糖尿病等生活習慣相關疾病有關。一般來說，短鏈脂肪酸具有高揮發性和高親水性。這使得使用傳統反相系統進行 LCMS 分析變得困難。因此，此方法包針對使用 3-硝基聯苯 (3-NPH) 衍生的短鏈脂肪酸 (C2 至 C5) 作為分析目標。設置 MRM 離子對後，可用於同時分析 22 種成分，包括與中心代謝途徑相關的有機酸。

短鏈脂肪酸
Acetic acid 醋酸
Propionic acid 丙酸
Butyric acid 丁酸
Isobutyric acid 異丁酸
Valeric acid 戊酸
Isovaleric acid 異戊酸
有機酸
2-oxobutyric acid
2-hydroxyglutaric acid
α-ketoglutaric acid
β-hydroxybutyric acid
Isocitric acid 異檸檬酸
Oxaloacetic acid 草乙酸
Citric acid 檸檬酸
Glyoxylic acid 乙醛酸
Glycolic acid 乙醇酸
Succinic acid 丁二酸
Lactic acid 乳酸
Pyruvic acid 丙酮酸
Fumaric acid 丁烯二酸
Maleic acid 順丁烯二酸
Malonic acid 丙二酸
Malic acid 蘋果酸

MRM 離子對設定

在進行 MRM 離子對設置時，可以通過指定 3-硝基聯苯衍生物的特徵產物離子來提高選擇性。有些有機酸具有源自酮的羰基，因此與羧酸和羰基反應的 3-硝基聯苯衍生物是 MRM 離子對選擇的目標。

包括衍生化在內的前處理方案

前處理所需的整個方案，包括使用 3-硝基聯苯的衍生化步驟，均包含在此方法包的使用說明書中。按照這些步驟，分析人員能夠立即執行從衍生化到上機和數據分析的整個過程。

使用 3-硝基聯苯衍生化時，使用碳二亞胺作為縮合劑，反應在溫和條件下進行。此外，為了有效地與短鏈脂肪酸和有機酸進行反應，此方法包包括使用 3-NPH 而不是更常用的 2-NPH 進行衍生化。另外，反應後的 3-NPH 衍生穩定，可通過與適量衍生試劑反應，對樣品中的短鏈脂肪酸或有機酸進行定量分析。此外，由於使用這種衍生化試劑在水溶液中發生反應，因此樣品不會被乾燥，揮發性成分也不會消失。

與 3-硝基聯苯 (3-NPH) 的衍生反應

 
 
 

以下範例說明使用 LCMS-8060 對短鏈脂肪酸/有機酸的標準混合溶液進行的分析。說明使用 3-NPH 衍生的短鏈脂肪酸/有機酸的 MRM 層析圖。數據顯示，結構異構物丁酸、異丁酸、富馬酸、馬來酸、檸檬酸和異檸檬酸等成分均可達到充分分離。此方法包包含 MRM 離子對的選擇, 以最佳化短鏈脂肪酸/有機酸的 3-NPH 衍生化當作特徵離子，因此得以分析原本在反相系統難以滯留的短鏈脂肪酸 (C2 至 C5) 和代表中心代謝途徑的有機酸。

chromatogram of short-chain fatty acids
 

備註和注意事項

LabSolutions LCMS 版本需為 5.99SP2 或更新。

 

LabSolutions 為 Shimadzu Corporation 的商標。

 
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